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- 病毒RNA提取實驗
病毒RNA提取實驗
病毒RNA提取可以：（1）用于RNA病毒復(fù)制機(jī)制研究；（2）用于反向遺傳學(xué)研究；（3）用于分子病毒學(xué)其他研究。實驗方法
實驗方法
TE-飽和酚/氯仿提取法
實驗方法原理 大多植物病毒RNA 為單鏈RNA ，并且其極性與mRNA 極性相同，植物病毒RNA 提取較為簡單，一般使用酚氯仿即可獲得滿意結(jié)果。 實驗材料 試劑、試劑盒 儀器、耗材 抗體 實驗步驟 展開一、實驗材料準(zhǔn)備
1. 材料
提純TMV病毒液（10 mg/ml）。
2. 設(shè)備
冷凍臺式離心機(jī)，低溫真空干燥儀，電泳儀，電泳槽。
3. 試劑
TE-飽和酚:氯仿（1:1），氯仿，3 M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE緩沖液，無RNA 酶的雙菌水。
二、操作步驟
1. 取一eppendorf管加入提純TMV（10 mg/ml)400 ml，再加入等體積酚/氯仿，蓋緊管蓋后用手充分振蕩1分鐘，4℃下12 000 g離心10分鐘。
2. 吸取水相于一新eppendorf管，再用酚/氯仿抽提，直至水相和有機(jī)相交界面無蛋白為止。
3. 吸取水相于新eppendorf心管，加入等體積氯仿，用手倒置離心管數(shù)十秒，4℃下12 000 g離心10分鐘。
4. 取水相，加入1/10倍體積的3 mol/L NaAc(pH5.2)，2.5倍體積的冰冷乙醇，混勻，-20℃30分鐘。
5. 4℃下12 000 g離心15分鐘，小心棄去上清液，用70%乙醇洗滌沉淀，4℃下12 000 g離心5分鐘。
6. 小心棄去上清液，沉淀真空干燥5分鐘或空氣干燥10分鐘，并溶于無RNA 酶的雙菌水或TE緩沖液中。
7. 取10 ml進(jìn)行電泳分析。注意事項 1. 整個操作應(yīng)盡可能在低溫下進(jìn)行。
2. 由于病毒RNA 鑲嵌于外殼蛋白里面，因此要充分剝?nèi)ゲ《就鈿さ鞍祝话阈枰啻芜M(jìn)行酚/氯仿的抽提。上海金畔生物科技有限公司
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